1.檢測(cè)試劑的準(zhǔn)備 
① Renilla 螢光素酶 plus 檢測(cè)底物（100×) , 每次開蓋前需進(jìn)行短暫低速離心。

②Renilla 螢光素酶 plus 檢測(cè)工作液配制：根據(jù)實(shí)際使用量，以 100:1 的比例將適量的 Renilla 螢光素酶 plus 檢測(cè)緩沖液與 Renilla 螢光素酶 plus 檢測(cè)底物（100×) 混勻，室溫避光備用。例如，將1mL Renilla 螢光素酶 plus 檢測(cè)底物加入 100mL Renilla 螢光素酶 plus 檢測(cè)緩沖液并充分混勻，即可制得 101mL Renilla 螢光素酶 plus檢測(cè)工作液。
注：建議現(xiàn)配現(xiàn)用，剩余的工作液當(dāng)次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，直接舍棄，不要留存。 
 
2.操作方法

（1）細(xì)胞檢測(cè)

 ① 從細(xì)胞培養(yǎng)箱中取出細(xì)胞培養(yǎng)板，放置 5-15min ，恢復(fù)至室溫。
 ② Renilla Luciferase 反應(yīng)檢測(cè)

使用多道排槍向每個(gè)細(xì)胞孔中加入平衡至室溫的含有底物的 Renilla 螢光素酶 plus檢測(cè)工作液，加樣體積與初始細(xì)胞培養(yǎng)液體積相同并充分混勻。例如，96孔板建議加入100μL培養(yǎng)液，相應(yīng)加入100μL檢測(cè)工作液。孵育5min后于化學(xué)發(fā)光儀或多功能酶標(biāo)儀中檢測(cè) Renilla Luciferase 報(bào)告基因活性。
 

（2）細(xì)胞裂解后的樣品檢測(cè)

·裂解細(xì)胞

a.貼壁細(xì)胞：吸去細(xì)胞培養(yǎng)基，用PBS緩慢輕柔地洗滌一次，洗去殘留的培養(yǎng)基，然后將液體全部吸棄。懸浮細(xì)胞：離心去上清后，用PBS清洗細(xì)胞一次，再次離心收集細(xì)胞沉淀。
b. 配制1×細(xì)胞裂解工作液。每次使用前以1:4 比例將螢光素酶報(bào)告基因細(xì)胞裂解液（5×）與 ddH2O充分混合（例如將1mL 螢光素酶報(bào)告基因細(xì)胞裂解液（5×）加入 4mL ddH2O充分混合），置于冰上備用。
c. 按照下表推薦加入適量的1×細(xì)胞裂解工作液，室溫下靜置或振動(dòng)搖晃裂解15min ，吹打并吸取全部細(xì)胞裂解產(chǎn)物至1.5mL離心管中，12000g 離心 5-10min ，取上清用于后續(xù)檢測(cè)。

注：若螢光素酶的表達(dá)水平過低，可適當(dāng)減少細(xì)胞裂解液用量以提高蛋白濃度，但需保證裂解液體 積可以覆蓋細(xì)胞孔板底面，否則會(huì)影響裂解效果。
 

·Renilla Luciferase 反應(yīng)檢測(cè) 
①小心吸取 20μL細(xì)胞裂解上清依次加入至檢測(cè)管或酶標(biāo)板中，再加入 100μL平衡至室溫的含有底物的Renilla螢光素酶plus檢測(cè)工作液。
②孵育5min后于化學(xué)發(fā)光儀或多功能酶標(biāo)儀中檢測(cè)Renilla Luciferase報(bào)告基因活性。
注：如果對(duì)于數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性要求不太高，可以在混勻后立即進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測(cè)。
 
保存條件
未開封試劑盒-20℃保存，自生產(chǎn)之日起12個(gè)月有效。 
 

注意事項(xiàng)
1. 檢測(cè)儀器選擇：能夠檢測(cè)化學(xué)發(fā)光的儀器都適用本試劑盒的檢測(cè)，但是針對(duì)相同的樣品，不同檢測(cè)器 本底信號(hào)值和測(cè)量值均可能不同；且對(duì)于同一樣本檢測(cè)，不同儀器的數(shù)值不可橫向比較。為防止孔間干 擾，推薦使用不透明白色或黑色細(xì)胞培養(yǎng)板。
2. 由于發(fā)光信號(hào)會(huì)受到檢測(cè)環(huán)境如培養(yǎng)基組分、溫度等影響，所以應(yīng)確保同組內(nèi)不同樣本檢測(cè)條件一致。
3. 酶促反應(yīng)對(duì)溫度較為敏感，加樣檢測(cè)前務(wù)必將檢測(cè)試劑以及細(xì)胞培養(yǎng)板平衡至室溫。
4. 如需同時(shí)檢測(cè)多個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)板，請(qǐng)盡量確保每個(gè)細(xì)胞板加入檢測(cè)溶液后孵育時(shí)間一致，再進(jìn)行數(shù)據(jù)讀取，以此獲得最佳的檢測(cè)結(jié)果。
5. Renilla 螢光素酶 plus檢測(cè)底物（100×）配制在無水乙醇中。由于無水乙醇容易揮發(fā)，有時(shí)會(huì)在初次使用時(shí)發(fā)現(xiàn)體積明顯小于包裝規(guī)格的情況，此時(shí)用無水乙醇把體積補(bǔ)足至包裝規(guī)格，混勻后即可使用。
6. 海腎螢光素酶催化的生物發(fā)光的最強(qiáng)波長(zhǎng)為480 nm。